TSKgel色譜柱用于ADC藥物質控分析

抗體偶聯藥物（ADC）是一種將抗癌藥物等偶聯到抗體中的生物藥物，近年來，以ADC和雙特異性抗體為代表的新型抗體藥物的研發(fā)進展迅速，目前全球已有16款ADC藥物被批準上市。此外，研發(fā)人員還開始探索均一性更高、副作用（脫靶毒性）更少的第三代ADC藥物，因此ADC的純化及質控分析方法將變得日趨重要。

1. ADC的關鍵質量屬性及其分析法
ADC的關鍵質量屬性及其分析法如表1所示。其中，非變性色譜的特點是在分離時可保持抗體的高級結構和活性。在分離藥物和抗體的偶聯比 (DAR) 不同的成分時，常使用疏水色譜法。

此外，還可以使用揮發(fā)性流動相的SEC/MS進行DAR分析1）。作為與抗體ADCC活性相關聯的分離，研發(fā)人員還探討了通過親和色譜法來分離ADC2，3）。另有文獻稱在抗體、寡核苷酸偶聯物 (AOC) 的偶聯比分析中使用了陰離子交換色譜 4）。

表1. ADC關鍵質量屬性及其分析法

                  TSKgel色譜柱用于ADC藥物質控分析                            

* MRM: Multiple reaction monitoring

Ref.: G. Petrie et al, White paper, 2017, https://www.eag。。ｃｏｍ/wp-content/uploads/2018/01/M-028517-Keys-to-Rapid-IND-Submission.pdf

2. ADC非變性色譜分析的分離模式
分析ADC時，為了抑制有效載荷偶聯而增加的疏水性，即使是在非變性條件下，有時也需要在流動相中添加異丙醇和乙腈等有機溶劑 (5～25%)。

表2中歸納了ADC非變性分析、變性分析的分離模式，以及各自的分離對象和特征。

表2. ADC非變性分析/變性分析的分離模式

TSKgel色譜柱用于ADC藥物質控分析  

3. ADC藥物的SEC分析
尺寸排阻色譜法通常用于分離ADC的二聚體、多聚體和片段。下圖是使用TSKgel UP-SW3000分析ADC的譜圖。

圖2是ADC藥物在不同SEC色譜柱上的分離情況比較。相比其他兩款SEC色譜柱，TSKgel UP-SW3000在多聚體的分離上可以獲得更多組分信息。

4. ADC的DAR值分析
在分離藥物和抗體的偶聯比不同的成分時，常使用分辨率高，非多孔型基質HIC色譜柱。東曹公司最近上市的新型HIC色譜柱TSKgel HIC-ADC Butyl提高了ADC的分離選擇性，能夠實現更高效的分析。

從譜圖中看到，TSKgel HIC-ADC Butyl分離ADC模擬物 (DAR=0,2,4,6,8) 的峰間距更寬，比市售其他品牌的HIC色譜柱具有更寬的分離范圍和更出色的分離度。