大賽璐手性柱是由具有光學活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相，通過引入手性環境使對映異構體間呈現物理特征的差異，從而達到光學異構體拆分的目的。
要實現手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級－偶級作用、π－π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。
在手性拆分中，溫度的影響是很顯著的。低溫增加手性識別能力，但可能引起色譜峰變寬而導致分離變差。因此確定手性分析方法過程中要考慮柱溫的影響，確定柱溫。
手性分析很關鍵的一項是流動相的選擇，手性分析一般都采用正相，使用多的流動相是正己烷、正庚烷、乙醇和異丙醇這四種，其中起洗脫作用的流動相是乙醇和異丙醇，正己烷和正庚烷用來調節流動相的洗脫強度。
正己烷和正庚烷對于樣品分離沒有什么太大的影響，不會改變選擇性和分離度，通常都可以混用，不過正庚烷比正己烷對人體的傷害要小很多，但價格是后者的一倍，所以歐美的很多大制藥公司多使用正庚烷，而國內多使用正己烷。
流動相里添加酸或者堿以后，基本上不會提供額外的選擇性，但是卻能提高分離度，因為峰形好了，相同的保留時間兩個峰之間的分離度自然就好了。但是流動相里添加酸或者堿以后，會在柱子上殘留，即使長時間用中性流動相沖洗也不會有什么效果，這一點在鍵合相手性柱上表現的尤為明顯。
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