凝膠過濾柱是一種基于分子大小差異進行分離的層析技術核心工具,也被稱為分子篩層析柱或尺寸排阻層析柱(Size Exclusion Chromatography, SEC)。
凝膠過濾柱操作注意事項:
層析柱的選擇:
理想的層析柱的直徑與長度之比是1:25~100。當用同樣直徑的層析柱分離兩種以上的物質時,長層析柱比短的分辨率高;當用同樣長度的層析柱分離兩種以上的物質時,層析柱直徑大的比小的分辨率高。
裝柱效果:
裝柱效果對凝膠過濾層析影響很大,應該嚴格按照說明要求,使用裝柱裝置裝柱。確保柱床表面平整,無溝流及氣泡,否則應重裝。
洗脫條件:
洗脫過程中應嚴格控制流速,切勿過快。上樣的體積要小,濃度不宜過高。加樣及整個洗脫過程中,嚴防柱面變干。
緩沖液的選擇:
純化過程必須嚴格控制緩沖液的pH及離子強度。避免使用對凝膠或樣品有損害的緩沖液。
柱子的保養與保存:
凝膠過濾柱需要注意防止微生物的生長。被微生物污染后的色譜柱將無法重現原來的分離效果與柱效,嚴重時會使凝膠色譜柱報廢。
常用的保存抑菌劑有0.02%疊氮鈉、0.002%洗必泰(hibitane,雙氯苯雙胍己烷)、0.01%~0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氫氧化鈉等。
值得注意的是溫度不能過低,以免凍結。為了不凍結可以提高保存時介質的離子強度。